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硫酸铵沉淀蛋白分析PPT下载

素材编号:
261406
素材授权:
免费下载
素材格式:
ZIP/RAR
素材上传:
weishenhe
上传时间:
2018-05-16
素材大小:
2.19 MB
素材类别:
仪器设备PPT
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硫酸铵沉淀蛋白分析PPT
硫酸铵沉淀蛋白分析PPT免费下载是由PPT宝藏(www.pptbz.com)会员weishenhe上传推荐的仪器设备PPT, 更新时间为2018-05-16,素材编号261406。 这是硫酸铵沉淀蛋白分析PPT,包括了实验背景,实验原理,实验试剂,实验步骤,结果计算等内容,欢迎点击下载硫酸铵沉淀蛋白分析PPT哦。不同盐浓度下各种蛋白质的溶解度是不同的,因此调节溶液的盐浓度可使各种蛋白质先后沉淀出来,或者使需要的酶与其它杂质蛋白分开,达到提纯目的,这就是分级沉淀法。 实验(一)硫酸铵分级沉淀分离苯丙 氨酸解氨酶(8学时)一、实验背景 了解硫酸铵沉淀蛋白质的原理;掌握分级沉淀分离酶的基本操作和方法二、实验原理盐析: 在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐(如硫酸铵、硫酸钠等)使蛋白质沉淀析出称为盐析,因为中性盐在水中解离时,能夺走蛋白质胶粒表面的水分子,破坏水膜结构;同时中性盐解离后形成的带电离子能中和蛋白质表面的电荷,这两种作用使溶液中蛋白质沉淀析出。 分级沉淀:不同盐浓度下各种蛋白质的溶解度是不同的,因此调节溶液的盐浓度可使各种蛋白质先后沉淀出来,或者使需要的酶与其它杂质蛋白分开,达到提纯目的,这就是分级沉淀法。硫酸铵沉淀一般在蛋白纯化的步骤中前期用,它简便且重复性好,但纯化倍数不高。分级沉淀中需加的固体硫酸铵或饱和硫酸铵溶液的量,可从硫酸铵饱和度量表中查得。 苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanine:ammonia lyase,简称PAL)是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切有关,在植物的正常生长发育和抵御病菌侵害的过程中起重要作用。 PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,产物反式肉桂酸在波长290nm处有最大吸收值。在反应系统中如果酶的加入量适当,反式肉桂酸的生成速率即A290升高的速率可在几小时内保持不变,因此,可通过测定A290 升高的速率来测定PAL的活力。规定1小时内A290增加0.01为PAL的一个活力单位。 三、实验试剂 0.1mol/L硼酸-硼砂缓冲液(PH8.7)酶提取液—0.1mol/L硼酸-硼砂缓冲液(内含1mmol/L EDTA、20mmol/Lβ-巯基乙醇)。取100ml 0.1mol/L 硼酸-硼砂缓冲液(PH8.7),加入0.037克EDTA钠盐,混匀,临用前再加入0.137mlβ-巯基乙醇,混匀; 0.6mmol/L L-Phe溶液。称取L-Phe 9.912毫克溶于100ml蒸馏水中; 6N HCl溶液固体(NH4)2SO4 四、实验步骤 1、 酶液提取: (1)取小麦幼苗(发芽5~6天)2克,用剪刀剪成小段后,立即放入有10 ml酶提取液的研钵中,于冰浴上研磨匀浆,匀浆结束前,再加入10ml酶提取液研磨混匀 (2)将已匀浆的酶液,用三层纱布过滤、挤干。滤液转入离心管,平衡后,于10,000 g下冷冻离心30min; (3)取离心后的上清液(酶粗提液),量出其体积V1,放置冰浴中备用。实验步骤 2. 硫酸铵分级沉淀酶蛋白: (1)从酶粗提液中吸取出0.5 ml,以作后面活力测定等用,根据实际体积和硫酸铵饱和度用量表,算出达到40%饱和度实际应加入酶液中的硫酸铵量,并称取该量的硫酸铵; 实验步骤 2. 硫酸铵分级沉淀酶蛋白: (3)将上述溶液到入离心管,3,000g下冷冻离心30min,倒上清液于烧杯内,保留沉淀,记为沉淀1; (4)根据硫酸铵饱和度用量表中,查出从40%到75%饱和度所需硫酸铵用量,算出并称取实际应加的硫酸铵量; (5)按上述(2)、(3)步同法处理,离心后,倒出上清液,保留沉淀,记为沉淀2。实验步骤 3.酶活力测定: (1)将沉淀[1]和沉淀[2]分别溶于1ml酶抽提液中,待沉淀全部溶解后,量出其体积V2、V3,记为沉淀液[1]和[2]; (2)分别从沉淀液[1]和[2]中吸出0.2ml加入另外二个试管内,然后用酶提取液分别将其稀释成1ml,记为稀释沉淀液[1]和[2]; (3)取试管7支,按下列编号并加入各试剂:实验步骤 3.酶活力测定: (4)以上试管放入恒温水浴(40℃)中保温60 min后,立即加入0.2ml 6N HCl,混匀,终止反应; (5)于波长290 nm处,以0号管溶液调零,分别记录测得的各管A290值。 酶活单位定义:规定1小时内A290增加0.01为PAL的一个活力单位。五、结果计算 1、PAL总活力计算: 分别算出每ml酶粗提液和沉淀液[1]和[2]中PAL的总活力; 2、算出40~75%硫酸铵沉淀中PAL的回收率: 下面开始实验! 上一页:二氧化碳检测仪说课PPT 下一页:天然气流量计检定PPT 硫酸-酸雨及防治教学PPT:这是硫酸-酸雨及防治教学PPT,主要介绍了基础梳理;硫酸(H2SO4);酸雨及其防治;硫酸盐;随堂训练;课时作业;练习题,欢迎点击下载硫酸-酸雨及防治教学PPT哦。酸雨能使非金属建筑材料(混凝土、砂浆和灰砂砖)表面硬化水泥溶解,出现空洞和裂缝,导致强度降低,从而建筑物损坏。科学家曾收集许多被酸雨毁害的石灰石和大理石建筑材料, 分析发现该样品的碳酸盐的颗粒中总是嵌入硫酸钙晶体, 硫从哪里来? 认定与酸雨有关。沙浆混凝土墙面经酸雨侵蚀后, 出现 “白霜” ; 经分析此种白霜就是石膏 (硫酸钙) 。 硫酸酸雨及其防治措施PPT:这是硫酸酸雨及其防治措施PPT,主要介绍了硫的重要化合物硫酸(H2SO4);酸雨及其防治;探究 浓硫酸的强氧化性和S(O_4^2"-" )/的检验;名师精讲;练习题,欢迎点击下载硫酸酸雨及其防治措施PPT哦。1.通过不同价态硫元素之间的相互转化认识硫单质、二氧化硫,浓硫酸的物理性质和主要化学性质,能书写相关反应的化学方程式。
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